鉄は重要な構成元素として多くの酵素中に含まれています。血中の鉄はすべてトランスフェリンと結合しており、ミオグロビン、ヘモグロビンなど、鉄を必要としているグロビンタンパク質の合成のため、赤芽球や各組織へ輸送されます。酸素を輸送するタンパク質の生成には鉄は不可欠であり、その欠乏は鉄分欠乏性貧血、慢性出血性貧血、感染性の貧血を引き起こします。また、肝炎、肝硬変などでトランスフェリンの増加、高濃度の鉄が観測されます。再生不良性貧血、悪性貧血なども鉄の増加を示します。

本法はFerrozineと鉄とのキレート錯体形成による可視部の呈色を観測し鉄濃度を求めます。 トランスフェリン等の輸送タンパク質に結合している鉄を、試薬中の弱酸、変性剤により解離させ、 鉄-Ferrozine錯体を形成させます。この錯体を波長560 nmで測定することにより鉄濃度を求めることができます。

◯ 本キットでダイレクトに定量可能な試料 例：血清、血漿、尿 キット中の変性剤が鉄をタンパクから解離させ、発色させます。特に前処理は必要ありません。 ※EDTAを含む採血管は測定値に影響を与えるので使用しないでください。 ※蓄尿をサンプルとする場合は塩酸添加による保存法を行って下さい。測定の際はpHを2 ~ 3になるよう調整してください。 ◯ 酸抽出の必要な試料 例：細胞ライセートや組織ホモジネート、その他液状試料 サンプルを低pHにすることでタンパクから鉄を解離させ、上清として回収し、アッセイ検体とします。 ただし、測定できるのは以下の化学種に限ります。 ・遊離鉄 ・タンパク結合（配位）鉄（ Protein-Fe2+、e.g.トランスフェエリン、フェリチン、メタロチオネイン） ・その他、配位結合性鉄 ※EDTAを含むLysis bufferは測定値に影響を与えるので使用しないでください。 ※有機鉄やヘム鉄などは酸分解を行って下さい。 ◯ マイクロウエーブ法及び有機物混酸分解が必要な試料 例：EDTAなどの強固なキレート剤を含む試料、有機鉄（ -C-Fe-C- 単結合している場合）、環状配位子内包鉄 （Fe-ポルフィリン等）を測定したい試料 酸抽出では解離してこない化学種を測定する場合や、強力な鉄キレート剤などの妨害物質を含むサンプルの測定に必要です。 ※各分解法で有機物を分解後、pH2 ~ 3に調整し、定容した試料をアッセイ検体としてください。

(1) DIW、標準液、アッセイ検体 40 µlをwell添加 (2) RA 200 µlを96 well plateにアプライ (3) 室温で5分間インキュベート (4) 主波長560 nmの吸光度OD1を測定 (5) 発色液 8 µlをwell添加 (6) 室温で5分間インキュベート (7) 主波長560 nmの吸光度OD2を測定 (8) 以下の計算式より鉄濃度を求める

(1) 本キットによる管理血清の測定 図1. 鉄濃度が既知である管理血清の測定結果 (2) 本キットによるブタ肝臓中鉄濃度の測定 図2. ICP-OES法と本キットによるブタ肝臓中鉄濃度測定結果

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Lawrence L. Stookey , Analytical chemistry, VOL. 42, NO. 7,(1970) 金井正光 臨床検査法提要、第32 版、p.579，金原出版(2005)

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