チオール基は生体内においてアルブミン等のタンパク質、グルタチオン、遊離チオール基等として存在します。チオールは強い還元能を持ち、活性酸素種と速やかに応答し、活性酸素を消去し、ジスルフィドとなります。タンパク質チオール基は他のアミノ酸側鎖と比較して酸化修飾を受けやすく、いくつかのタンパク質や酵素がチオール基の酸化還元状態により、機能を制御されています。 　血清中のチオール濃度は生体内のレドックス環境の指標の1つであり、酸化ストレスマーカーとしても着目されています。がんや肝疾患など、様々な疾患において血清チオール濃度が低下していることが報告されており、血清チオール濃度が疾病・老化などに係る指標となる可能性が示唆されています。

本法はEllman試薬(DTNB:5,5′-Dithiobis(2-nitrobenzoic acid))とチオール(SH)基との反応による可視部の発色を観測し、SH基の総量を求めるものです。DTNBはSH基と反応し、TNB(5-Mercapto- 2-nitrobenzoic acid)を生成します。この生成物の波長412nmにおける吸光度を測定することにより、試料中のチオール基の濃度を求めます。 https://static.wixstatic.com/media/ab41e7_5f44b5ca9b9a416485b6db450e6d251f~mv2.png

◯ 本キットでダイレクトに定量可能な試料 例：血清、血漿

※使用する直前に標準試料（アセチルシステイン粉末）をラベル記載の水量にて溶解さてください。 ※溶解させた標準液は冷凍で保管してください。 (1) DIW、標準液、アッセイ検体 20 μlを96 well plateにアプライ https://static.wixstatic.com/media/ab41e7_3fa2cbe4af1d4e3a9df709e3cdee8812~mv2.jpg (2) RA 200 μlをwellへ添加 https://static.wixstatic.com/media/ab41e7_9c525768f2634b9da723fb3952374ccd~mv2.jpg (3) 室温で5分間インキュベート https://static.wixstatic.com/media/ab41e7_3620752e682a4677a9354da625673aa4~mv2.jpg (4) 主波長412 nmの吸光度を測定(OD1) https://static.wixstatic.com/media/ab41e7_d8a06eed1d204c8d9b08bba2d9ee9b2b~mv2.jpg (5) RB 30 μlをwellへ添加 https://static.wixstatic.com/media/ab41e7_89fcf3ff07294c7f94265b6d423a3c7c~mv2.jpg (6) 室温で5分間インキュベート https://static.wixstatic.com/media/ab41e7_c15ee673000145a0b458c77ed900082e~mv2.jpg (7) 主波長412 nmの吸光度を測定(OD2) https://static.wixstatic.com/media/ab41e7_9abf920eaa8d4e14ad3d6db84c763f33~mv2.jpg (8) 以下の計算式よりチオール濃度を求める https://static.wixstatic.com/media/ab41e7_9e962a6c06704fc6a7bed3d17f3f66d5~mv2.png

(1) 直線性 https://static.wixstatic.com/media/ab41e7_121a34dfa4c04e0f9ae88cf7b678f788~mv2.png 図1. 標準試料希釈直線性

• “Tissue sulfhydryl groups.” Arch. Biochem. Biophys. 82 (1): 70–7. (1959). (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/13650640) • ”酸化ストレスとレドックス制御〜タンパク質の酸化的修飾と活性調整〜”生物試料分析 Vol.32,No4,2009 (http://j-jabs.umin.jp/32/32.265.pdf) • “Reduced Level of Serum Thiols in Patients with a Diagnosis of Active Disease. “Journal of Anti-Aging Medicine.Vol.6, Number 4, 2003 (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15142434)

準備中

弊社製品は以下の販売代理店よりご購入いただけます。 フナコシ 株式会社(https://www.funakoshi.co.jp) レドックスアッセイ チオール定量キット (製品紹介ページ) (https://www.funakoshi.co.jp/contents/45991) • メール：sales@funakoshi.co.jp • 電話：03-5684-1615 • FAX：03-5684-1634 株式会社 池田理化 (http://www.ikedarika.co.jp)