銅を含むタンパク質の主な役割は酸化還元機能です。現在知られている、銅を含む酵素の殆どが分子状酸素と直接反応します。

プラズマ中の銅のおよそ95％はα-2-グロブリン、セルロプラスミン、フェロキシダーゼ活性を持つ酸化酵素と結合しています。

銅の欠乏に関連する病気として、心臓疾患、骨粗しょう症、骨関節炎、Menkes症候群、ウイルソン病などがあります。

また、生体内の抗酸化機能の低下についても報告されています。一方、過剰の銅は有毒となります。

本法は3-5 DiBr-PAESAと銅とのキレート錯体形成による可視部の呈色を観測し銅濃度を求めます。

セルロプラスミン、及びタンパク質に結合した銅を、弱酸、変性剤により解離させ、銅-3-5 DiBr-PAESA錯体を形成させます。 この銅キレート錯体を波長582nmで測定することにより銅濃度を求めることができます。

◯ 本キットでダイレクトに定量可能な試料

例：尿

キット中の変性剤が銅をタンパクから解離させ、還元剤によって還元したのち発色させます。特に前処理は必要ありません。

※蓄尿をサンプルとする場合は、塩酸添加による保存法を行って下さい。測定の際はpHを2~3になるよう調整してください。

◯ 酸抽出の必要な試料

例：細胞ライセートや組織ホモジネート、その他液状試料

サンプルを低pHにすることでタンパクから銅を解離させ、上清として回収し、アッセイ検体とします。

ただし、測定できるのは以下の化学種に限ります。

・遊離銅

・タンパク結合（配位）銅（ Protein-Cu2+ 、 e.g.アルブミン、メタロチオネイン）

・その他、配位結合性銅

※EDTAを含むLysis bufferは測定値に影響を与えるので使用しないでください。

※有機銅やヘム銅などは酸分解を行って下さい。

◯ マイクロウエーブ法及び有機物混酸分解が必要な試料

例：EDTAなどの強固なキレート剤を含む試料、有機銅（ -C-Cu-C- 単結合の場合）、環状配位子内包銅 （Cu-ポルフィリン等）を測定したい試料

酸抽出では解離してこない化学種を測定する場合や、強力な銅キレート剤などの妨害物質を含むサンプルの測定に必要です。

※各分解法で有機物を分解後、pH2 ~ 3に調整し、定容した試料をアッセイ検体としてください。

(1) DIW、標準液、アッセイ検体 100 μlを96 well plateにアプライ

(2) 発色液 140 μlをwell添加

(3) 室温で10分間インキュベート

(4) 主波長582 nmの吸光度を測定

(5) 以下の計算式より銅濃度を求める

準備中

• Hifumi E et al. A novel method of preparing the monoform structure of catalytic antibody light chain. FASEB J. 2016 Feb. PubMed PMID: 26527062.

• Asada N et al. Pheomelanin Formation and Low Tyrosinase Activity in Fading Body Color Variant BdlR Strain Oryzias latipes. J Life Sci. 2014 June.

• Tezuka T et al. Cuprizone short-term exposure: astrocytic IL-6 activation and schizophrenia-like behavior. J Pharmacol Sci. 2013 March.

• 岩渕拓也：技術情報協会（編）　微量金属分析とその前処理技術,p192-200(2015)

• 岩渕拓也、鈴木裕子：技術情報協会（編）　最先端バイオマーカーを用いた診断薬/診断装置開発と薬事対応(2015)

• Abe, A., Yamashita, S., Noma, A., Clin. Chem., 552-554 (1989).

• Makino T., Kiyonega. Clin. Chem. Acta, 171,19 (1988)

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メタロアッセイ低濃度銅測定LSキット (製品紹介ページ)

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