カルシウムは体重の約1.5-2.9％を占めており、骨格、軟組織の形成に重要な元素です。 体内のカルシウムの90％はハイドロキシアパタイトとして骨に存在し、1％が細胞内、0.1％が血中に存在しています。生理的機能としては細胞中の浸透圧調整、血液凝固、筋委縮、神経刺激、酵素の活性化などに関与しています。血中のカルシウムは45％がアルブミン、グロブリンと結合しており、10％がリン酸塩、45％が遊離イオンです。 血清カルシウムが低下すると、副甲状腺ホルモンが分泌され、骨吸収、腎臓での再吸収、活性型ビタミンDの生成に伴う小腸からのカルシウムの吸収が促進され、血清中の濃度が上昇します。このような機構により血清中での濃度は厳密に調節されており、正常値が狭いレンジ内に推移しています。 低カルシウム血症としては、くる病、骨軟化症、テタニー、骨粗しょう症、動脈硬化を起こし、高カルシウム血症では抑うつ、意識障害、疲労感、知覚過敏、不整脈、高血圧などに関与することが知られています。

本法は Chlorophosphonazo-Ⅲ とカルシウムとのキレート錯体形成による可視部の発色を観測し、 カルシウム濃度を求めるものです。 Chlorophosphonazo-Ⅲ は中性領域でカルシウムと錯形成します。 このキレート錯体における波長 690nm(副波長 740~810 nm)の吸光度を測定することによりカルシウム濃度を求めることができます。

◯ 本キットでダイレクトに定量可能な試料 例：血清、血漿 キット中の変性剤がカルシウムをタンパクから解離させ、発色させます。特に前処理は必要ありません。 ※EDTAを含む採血管は測定値に影響を与えるので使用しないでください。 ◯ 希釈が必要な試料 例：尿 測定範囲を超える可能性があります。５倍を目安に希釈し、測定してください。 ※蓄尿をサンプルとする場合は、塩酸添加による保存を行って下さい。測定の際はpHが2~3になるよう調整してください。 ※随時尿は成分が変動いたしますので、希釈倍率が適しない場合があります。早朝尿も同様に、希釈倍率にご注意ください。 ※検体を希釈した場合は、濃度計算時に希釈倍率のかけ忘れに注意してください。 ◯ 酸抽出の必要な試料 例：細胞ライセートや組織ホモジネート、その他液状試料 サンプルを低pHにすることでタンパクからカルシウムを解離させ、上清として回収し、アッセイ検体とします。 ただし、測定できるのは以下の化学種に限ります。 ・遊離カルシウム ・タンパク結合（配位）カルシウム（ Protein-Ca2+、 e.g アルブミン、メタロチオネイン） ・その他、配位結合性カルシウム ※EDTAを含むLysis bufferは測定値に影響を与えるので使用しないでください。 ※有機カルシウムなどは酸分解を行って下さい。 ◯ マイクロウエーブ法及び有機物混酸分解が必要な試料 例：EDTAなどの強固なキレート剤を含む試料、有機カルシウム（　-C-Ca-C- 単結合している場合）、環状配位子内包カルシウム を含む試料 酸抽出では解離してこない化学種を測定する場合や、強力なカルシウムキレート剤などの妨害物質を含むサンプルの測定に必要です。 ※各分解法で有機物を分解後、pH2 ~ 3に調整し、定容した試料をアッセイ検体としてください。

(1) ) DIW、標準液、アッセイ検体 2 μlを96 well plateにアプライ (2) RA 240 μlをwell添加 (3) 室温で10分間インキュベート (4) 主波長690nm（副波長740 〜 800 nm）の吸光度を測定 (5) 以下の計算式よりカルシウム濃度を求める

(1) 本キットによる管理血清の測定 図1. カルシウム濃度が既知である管理血清の測定結果 (2) 段階希釈したカルシウム標準試料の測定 図2. カルシウム標準試料の測定結果

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